聚谷氨酸分子量检测 成分含量检测

聚谷氨酸分子量及成分含量检测方法

分子量检测方法

1. 凝胶渗透色谱法(GPC)/尺寸排阻色谱法(SEC)

• 原理：基于分子尺寸差异进行分离

• 常用条件：

• 流动相：0.1M NaNO₃或PBS缓冲液(pH 7.4)

• 色谱柱：TSK-GELl等亲水性凝胶柱

• 检测器：示差折光检测器(RI)或多角度激光光散射检测器(MALLS)

• 优点：可测定分子量(Mw, Mn)和分布(PDI)

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2. 粘度法

• 通过Mark-Houwink方程计算特性粘度与分子量关系

• 需要已知K和α参数

3. 质谱法

• MALDI-TOF MS(基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱)

• 适用于低分子量聚谷氨酸(<10kDa)

成分含量检测方法

1. 高效液相色谱法(HPLC)

• 反相HPLC：C18柱，流动相含0.1%TFA

• 离子交换色谱：分析不同聚合度组分

2. 氨基酸分析法

• 酸水解(6M HCl，110°C，24h)后分析

• 采用氨基酸分析仪或HPLC衍生化法

3. 紫外分光光度法

• 基于谷氨酸残基在210nm左右的吸收

• 需建立标准曲线

4. 滴定法

• 羧基含量测定(酸碱滴定)

• 适用于高纯度样品

样品前处理注意事项

1. 水溶性样品可直接溶解于适当缓冲液

2. 不溶性样品可能需要酶解或化学处理

3. 分子量测定前需充分溶解并过滤(0.22μm)

常用标准参考

• USP通则<621>色谱法

• GB/T 34820-2017 化妆品用聚谷氨酸

• ISO 2211-2016 生物技术-生物制品表征指南