谷物β-葡聚糖含量的测定 食品葡聚糖的检测

谷物β-葡聚糖含量测定及食品葡聚糖检测方法及标准如下：

一、谷物β-葡聚糖含量测定方法

1. 酶水解-比色法（常规方法）

• 原理：利用β-葡聚糖酶特异性水解β-1,3/1,4或β-1,3/1,6键生成寡糖，再通过葡萄糖氧化酶-过氧化物酶（GOPOD）显色剂测定葡萄糖含量，换算为β-葡聚糖含量。

• 步骤：

1. 样品处理：粉碎谷物样品过80目筛，称取100 mg于离心管中，加入4 mL 50%乙醇溶液，80℃水浴10分钟灭活内源酶，离心弃上清。

2. 酶解：沉淀用2 mL水复溶，加入β-葡聚糖酶（如lichenase + β-glucosidase），37℃水解1小时，沸水浴5分钟终止反应，离心取上清液。

3. 显色测定：取0.1 mL上清液，加入3 mL GOPOD试剂，50℃反应20分钟，测540 nm吸光度，对照葡萄糖标准曲线计算β-葡聚糖含量。

• 计算公式：

β-葡聚糖(%)=m×106C×V×D×0.9×100

其中，C为葡萄糖浓度（μg/mL），V为总体积（mL），D为稀释倍数，m为样品质量（g），0.9为葡萄糖换算为β-葡聚糖的系数。

2. 高效液相色谱法（HPLC，仲裁法）

• 原理：酶解后样品经氨基柱或糖专用柱分离，示差折光检测器（RID）定量检测葡萄糖含量。

• 步骤：

1. 样品处理：同酶水解-比色法。

2. 色谱条件：流动相为乙腈-水（75:25，v/v），流速1.0 mL/min，柱温40℃，进样量10 μL。

3. 定量分析：通过保留时间定性，外标法定量。

• 优势：准确性高，适用于复杂基质样品。

二、食品葡聚糖检测方法

1. 苯酚-硫酸法

• 原理：苯酚-硫酸试剂与多糖中的己糖及糠醛酸反应生成橙红色物质，485 nm波长处吸光度与葡聚糖含量成正比。

• 步骤：

1. 标准曲线绘制：精密吸取葡聚糖标准使用液（0.1 mg/mL）0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50、2.00 mL，加苯酚溶液1.0 mL，浓硫酸10.0 mL，沸水浴煮沸2分钟，冷却后测485 nm吸光度。

2. 样品处理：称取2 g样品，沸水浴提取2小时，过滤后取滤液5.0 mL，加无水乙醇20 mL沉淀多糖，离心后残渣用80%乙醇洗涤，复溶后定容至5.0 mL。

3. 测定：取滤液2.0 mL，加NaOH溶液2.0 mL、铜试剂溶液2.0 mL，沸水浴煮沸2分钟，离心后残渣用硫酸溶液2.0 mL溶解，定容至50 mL，测吸光度。

• 适用范围：香菇、灵芝等真菌类及谷物中的葡聚糖检测。

2. 刚果红法

• 原理：刚果红与β-葡聚糖结合具有高度专一性，通过测定溶液吸光度计算含量。

• 步骤：

1. 样品处理：将样品溶液与刚果红混合，一定温度下反应一定时间。

2. 测定：测溶液吸光度，对照β-葡聚糖标准曲线计算含量。

• 优势：操作简单，适用于大批量样品测定。

三、检测标准

1.

• AACC 32-23.01：美国谷物化学家协会标准，规定酶法测定β-葡聚糖含量。

2. 中国标准

• GB/T 35807-2018：《燕麦β-葡聚糖含量的测定》，规定酶水解-比色法或HPLC法。

• GB 5009.289-2023：《食品中β-葡聚糖的测定》，规定酶水解-比色法（主方法）或HPLC法（仲裁法）。

• NY/T 2006-2011：《谷物及其制品中β-葡聚糖含量的测定》，规定酶联免疫吸附法、HPLC法等，并规定不同谷物制品的β-葡聚糖含量限量（如小麦粉≤40%，面包≤30%）。

四、检测注意事项

1. 样品处理：需去除蛋白质、淀粉等干扰物质，如加入三氯乙酸或乙醇洗涤。

2. 酶解条件：严格控制温度和时间，防止过度水解。

3. 标准曲线：确保线性范围（如0.1~1.0 mg/mL）和相关性（R²≥0.999）。

4. 仪器校准：分光光度计、HPLC等需定期校准，保证数据准确性。