基因毒性杂质检测案例 液质联用方法学开发方法学验证

基因毒性杂质(或遗传毒性杂质, Genotoxic Impurity, GTI )即化合物本身直接或间接损伤细胞DNA，产生基因突变或体内诱变，具有致癌可能或者倾向。基于杂质对药品质量有着显著影响，无论进行任何药品注册申报都对杂质分析和控制有相应的法规要求，为确保药品的功效、质量与安全需要对其中的基因毒性杂质进行相应的检测。

微源检测实验室分享一则基因毒性杂质检测案例。案例参考药典分析方法验证指导原则的要求，采用液质联用法对片剂中多种亚硝胺杂质：N-亚硝基二jiaan（NDMA）、N-亚硝基二乙胺（NDEA）、乙基异丙基亚硝胺（NEIPA）、N-亚硝基二异丙胺（NDIPA）和N-亚硝基二正丁胺（NDBA）检测并进行方法开发。

处理样品作为供试品溶液。另取NDMA、NDEA、NEIPA、NDIPA和NDBA各适量，用甲醇溶解并用空白溶液稀释至每1ml约含NDMA10ng，NDEA、NEIPA、NDIPA和NDBA各2.7ng的溶液，作为对照品溶液，选择适当的色谱柱，优化梯度条件和质谱参数。精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别注入液质联用仪。

对方法的专属性、溶液稳定性、定量限及检测限、线性、准确度和精密度等进行验证。取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液、限度加标供试品溶液分别进样，记录色谱图。检测结果显示空白溶液无干扰；

取检测限溶液和6份定量限溶液分别进样，记录色谱图，NDMA的检测限为0.1000ng/mg，信噪比为4.23；NDEA、NEIPA、NDIPA和NDBA的检测限为0.0270ng/mg，信噪比Zui低为11.43。6份定量限溶液中NDEA、NEIPA、NDIPA和NDBA的峰面积或相对校正因子RSD（%）不大于4.50%；

各限度加标供试品溶液中，各亚硝胺杂质回收率、平均回收率和总平均回收率均在86.46%~119.14%之间。各浓度加标溶液中，各亚硝胺杂质的回收率RSD（%）均不大于8.18%，总回收率RSD（%）不大于5.75%；该方法符合各验证指标要求，适用于片剂中多种亚硝胺杂质的检测。

基因毒性杂质的来源可能为原料药合成过程中的起始物料、试剂、中间体、催化剂和反应副产物等，在合成、储存或者制剂过程中也可能因降解而产生，种类繁多，是一件非常富有挑战性的工作，微源检测对检测限度非常低的基因毒性杂质，配备有多台高灵敏度分析仪器，结合领域专家工程师拥有丰富的检测经验，能够对不同类型杂质应用不同分析测试方法，满足数据准确性要求。如您有相关检测需求，欢迎致电咨询！