蛙饲料赖氨酸含量检测 钙含量 总磷检测

1. 赖氨酸含量检测

赖氨酸是蛋白质的一部分，检测前必须将蛋白质破坏，释放出游离的赖氨酸。

常用标准： GB/T 18246-2019 《饲料中氨基酸的测定》

方法一：氨基酸分析仪法（推荐）
这是Zui经典和准确的方法。

• 原理：

1. 酸水解： 饲料样品在110°C、6mol/L盐酸条件下，水解24小时，使蛋白质中的赖氨酸释放出来。

2. 分离与检测： 水解后的样液经中和、稀释后，注入氨基酸分析仪。不同氨基酸在专用离子交换色谱柱上被分离，与茚三酮试剂反应产生颜色，在570nm波长下进行检测。

• 关键步骤：

• 称样： 样品需粉碎并通过40-60目筛。

• 无氧水解： 向水解管中充入高纯氮气或抽真空，防止氨基酸在加热时被氧化。

• 定容与过滤： 水解冷却后，稀释定容，并用滤膜过滤后方可上机。

• 注意事项：

• 此法测定的是包括结合态和游离态在内的总赖氨酸。

• 盐酸的纯度和浓度至关重要。

• 对于含有淀粉、糖分较高的饲料，水解时可能发生美拉德反应，导致赖氨酸损失，需特别注意。

方法二：高效液相色谱法
此法应用也越来越广泛，速度可能更快。

• 原理： 样品经酸水解后，使用HPLC进行分离。通常需要对赖氨酸进行柱前衍生（如使用邻苯二甲醛、芴甲氧羰酰氯等试剂），生成有强紫外或荧光吸收的衍生物，用紫外或荧光检测器进行检测。

• 优点： 分析时间短，灵敏度高。

• 缺点： 衍生过程需要严格控制条件。

2. 钙含量检测

常用标准： GB/T 13885-2017 《饲料中钙、铜、铁、镁、锰、钾、钠和锌含量的测定 原子吸收光谱法》

方法一：原子吸收光谱法（主流方法）

• 原理：

1. 样品灰化： 将样品在550°C马弗炉中高温灼烧（干法灰化），使有机物彻底分解，钙转化为氧化钙。

2. 酸溶： 用盐酸溶解灰分，将钙转化为离子状态。

3. 测定： 将溶液吸入原子吸收光谱仪的火焰中，钙原子在特定波长（通常为422.7nm）下会吸收光源发出的特征光，吸光度与样品中钙的浓度成正比。

• 关键步骤：

• 完全灰化： 必须灰化至无黑色碳粒，呈白色或灰白色。

• 添加镧盐： 在待测液中需加入氯化镧或氧化镧溶液，以消除磷酸根等物质的干扰。

• 标准曲线： 必须使用钙标准溶液制作准确的标准曲线。

方法二：高锰酸钾滴定法（经典方法）

• 原理：

1. 样品处理： 同AAS法，先进行干法灰化，盐酸溶解。

2. 沉淀： 在酸性条件下，加入草酸铵溶液，使钙离子形成草酸钙沉淀。

3. 溶解与滴定： 用硫酸溶解草酸钙沉淀，释放出草酸，用标准高锰酸钾溶液滴定草酸。根据高锰酸钾的消耗量计算出钙的含量。

• 优点： 无需大型仪器。

• 缺点： 操作步骤繁琐，耗时较长，对操作人员技术要求高。

3. 总磷含量检测

常用标准： GB/T 6437-2018 《饲料中总磷的测定 分光光度法》

• 原理：

1. 样品分解： 样品在550°C马弗炉中高温灼烧（干法灰化），使有机物中的磷转化为磷酸盐。

2. 酸溶： 用盐酸溶解灰分。

3. 显色： 在酸性条件下，样液中的磷酸根与钒钼酸铵试剂反应，生成黄色的磷钒钼酸络合物。

4. 比色： 用分光光度计在400-450nm波长下（通常为420nm）测定该黄色溶液的吸光度。吸光度值与磷的浓度成正比。

• 关键步骤：

• 灰化与溶解： 确保所有磷都转化为正磷酸盐并完全溶解。

• 显色条件： 严格控制显色剂的加入量和显色时间（通常10-30分钟后颜色稳定）。

• 酸度控制： 反应体系的酸度对显色有显著影响，必须按标准操作。

• 注意事项：

• 此方法测定的是总磷，包括植酸磷等所有形式的磷。

• 标准曲线的线性范围良好，但需确保待测样品的吸光度值落在标准曲线范围内。