大米β-葡聚糖含量测试 超氧化物歧化酶SOD检测

大米β-葡聚糖含量测试

测试方法：

酶-比色测定法（NY/T 2006-2011）：

原理：基于酶促反应和比色原理。β-葡聚糖在特定酶的作用下被水解成葡萄糖，葡萄糖再与特定的试剂反应形成有色化合物，该化合物的吸光度与葡萄糖含量成正比，从而间接测定β-葡聚糖的含量。

试剂与仪器：包括地衣聚糖酶溶液、β-葡萄糖苷酶溶液、葡萄糖氧化酶-过氧化物酶-缓冲液混合物等酶制剂，葡萄糖标准贮存溶液及工作液，磷酸钠缓冲液、乙酸钠缓冲液等缓冲液，50%乙醇溶液等。仪器方面，需要旋风磨或粉碎机、离心机、水浴锅、旋涡混合仪、pH计、分析天平、分光光度计、移液器、容量瓶、试管等玻璃器皿。

测试步骤：

样品制备：取适量大米样品，粉碎后过筛，混匀备用。

试剂空白测定：移取适量乙酸钠缓冲液至试管中，作为试剂空白。

葡萄糖标准工作液测定：平行移取葡萄糖标准贮存溶液至试管中，加入乙酸钠缓冲液，进行测定，绘制标准曲线。

样品测定：称取适量样品，加入酶制剂和缓冲液，在一定条件下进行酶促反应。反应结束后，加入葡萄糖氧化酶-过氧化物酶-缓冲液混合物，测定吸光度。

结果计算：根据标准曲线和样品吸光度，计算样品中β-葡聚糖的含量。

高效液相色谱紫外检测法：

原理：通过分离β-葡聚糖分子并进行定量测定，从而计算样品中β-葡聚糖的含量。

特点：准确度高、重复性好，但仪器设备较昂贵，对样品预处理要求较高。

其他方法：

比色法：操作简便、成本较低，但准确性受样品中其他成分干扰较大。

荧光法：灵敏度高、准确性好，但仪器设备较昂贵，对样品预处理要求较高。

酶标仪法：操作简便、准确性较高，适用于大批量样品检测。

测试意义：β-葡聚糖是大米中的重要营养成分，具有抗炎、抗氧化、降血脂等多种生理功能。测定大米中β-葡聚糖的含量，对于评估大米的质量和品质具有重要意义。

超氧化物歧化酶SOD检测

检测方法：

邻苯三酚自氧化法（改良Marklund法）：

原理：基于经典的分光光度法。在碱性条件下，邻苯三酚自氧化成红橘酚，产生O2-。SOD催化O2-发生歧化反应，从而抑制邻苯三酚的自氧化。样品对邻苯三酚自氧化速率的抑制率，可反映样品中的SOD含量。

特点：特异性强，所需样本量少，操作快速简单，重复性好，灵敏度高，试剂简单。

细胞色素C还原法（McCord法）：

原理：黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系中产生的O2-使一定量的氧化型细胞色素C还原为还原型细胞色素C，后者在550nm有Zui大光吸收。在SOD存在时，由于一部分O2-被SOD催化而歧化，O2-还原细胞色素C的反应速度则相应减少，即其反应受到抑制。将抑制反应的百分数与SOD浓度作图可得到抑制曲线，由此计算样品中SOD活性。

化学发光法：

原理：黄嘌呤氧化酶在有氧条件下，催化底物黄嘌呤或次黄嘌呤发生氧化反应生成尿酸，产生O2-。后者可与化学发光剂鲁米诺反应，使其产生激发。SOD能清除O2-，从而抑制鲁米诺的化学发光。本法可应用于SOD的微量测定，不仅灵敏度高，简便易行，特异性与准确性至少与细胞色素C还原法类似。

免疫学方法：

原理：测定样品中SOD的质量，特异性较好。免疫法有放射免疫法、化学发光免疫分析法、ELISA法等。

特点：只能测定抗体相应的抗原，对于检测不同种类的SOD，则须制备相应的特异性抗体，过程烦琐。

NBT（氮蓝四唑）光还原法：

原理：当反应体系中有可被氧化的物质（如甲硫氨酸）时，核黄素可被光还原，还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化，使O2-被单电子还原产生O2-，O2-则可将NBT还原成蓝色的甲腙，后者在560nm处有Zui大吸收值。SOD能够清除O2-，当反应体系中有SOD存在时可抑制NBT的还原，酶活性越高，抑制作用越强，反应液的蓝色越浅。可通过测定A560来计算SOD活性。

检测意义：SOD是一种金属酶，含有铜和锌两种离子，能够清除有害的氧自由基，提高免疫力。检测大米或其他生物样品中的SOD活性，对于评估其抗氧化能力和健康效益具有重要意义。