食品中果聚糖的测定 三氯蔗糖（蔗糖素）的测定

食品中果聚糖与三氯蔗糖（蔗糖素）的测定方法及关键分析

一、食品中果聚糖的测定

1. 核心检测方法

• 离子色谱法（GB 5009.255-2016）

• 蔗糖酶（E-SUCR）：特异性水解蔗糖，避免干扰果聚糖检测。

• 果聚糖酶（/E-FRMXPD）：由内切菊粉酶和外切菊粉酶混合而成，纯化后去除杂酶（如α-半乳糖苷酶），避免水解β-葡聚糖。

• 原理：样品经热水浸提后，蔗糖被蔗糖酶水解为葡萄糖和果糖，经还原为糖醇，中和多余试剂后，果聚糖被果聚糖酶水解为葡萄糖和果糖，Zui终通过离子色谱-脉冲安培检测器测定果糖含量，并换算为果聚糖含量。

• 适用范围：乳制品、婴幼儿配方食品、固体饮料等低聚果糖、多聚果糖或菊粉的测定。

• 关键酶制剂：

• 高效液相色谱串联质谱法（AOAC Method 999.03）

• 原理：果聚糖经酶解为果糖和葡萄糖后，通过质谱定性定量分析，适用于复杂基质（如草类饲料中Levan型果聚糖）。

• 优势：高灵敏度、抗干扰能力强，可扩展至支链型果聚糖检测。

2. 方法对比与推荐

• 国标法（离子色谱法）：操作规范，适用于常规食品检测，但需严格配置酶溶液（如蔗糖酶溶液浓度为4.5 U/mL，果聚糖酶溶液为455 U/mL）。

• AOAC法（质谱法）：适合科研或高精度需求，尤其对支链型果聚糖检测更准确，但设备成本较高。

3. 试剂盒应用

• K-FRUC试剂盒：集成重组酶（如内切果聚糖酶），覆盖AOAC方法999.03（食品）、2018.07（动物饲料）、2016.14（婴幼儿配方食品），简化操作流程，减少酶配置误差。

二、食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定

1. 核心检测方法

• 高效液相色谱法（HPLC）

• 原理：通过雾化蒸发去除流动相，检测器响应不依赖样品光学特性，适合挥发性低于流动相的化合物。

• 优势：避免紫外检测器对无发色团化合物的限制，但需高压氮气或空气辅助。

• 原理：样品经甲醇水提取、固相萃取净化后，用C18色谱柱分离，示差检测器定量。

• 关键参数：柱温35℃±0.5℃，流动相流速1.0 mL/min，线性范围0.100–0.800 mg/mL。

• 第一法（示差折光检测器）：

• 第二法（蒸发光散射检测器，ELSD）：

• 高效液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）

• 原理：结合HPLC分离与质谱高分辨率定性定量，适用于复杂基质（如大豆蛋白类样品、茶叶）。

• 优势：基质效应低，可通过正离子模式切换功能减少污染，提高准确性。

2. 方法对比与推荐

• HPLC法：

• 示差检测器：成本较低，但受温度、流速影响大，需长时间平衡基线。

• ELSD检测器：通用性强，但需定期清洁检测池，避免污染。

• LC-MS/MS法：

• 适用性：复杂基质，尤其对低含量三氯蔗糖检测更灵敏。

• 标准要求：GB 5009.298-2023明确推荐用于含大豆蛋白、茶叶等样品的检测。

3. 样品前处理优化

• 液态酒类：直接蒸干复溶测定。

• 含固体物质酒类：蒸干后用水反复提取，中性氧化末净化。

• 果冻、蜜饯：加水涡旋、甲醇提取，乙酸锌和亚铁沉淀蛋白。

• 复杂基质：固相萃取柱（N-乙烯基吡咯烷酮填料）净化，减少干扰峰。

三、综合对比与选择建议

选择建议：

1. 果聚糖检测：

• 常规检测优先选国标离子色谱法，搭配高纯度酶制剂（如纽勤Megazyme系列）。

• 科研或高精度需求选AOAC质谱法，使用K-FRUC试剂盒简化流程。

2. 三氯蔗糖检测：

• 简单基质选HPLC示差检测器，成本低且操作简便。

• 复杂基质（如含大豆蛋白、茶叶）必须选LC-MS/MS，避免假阳性。