食品叶绿素含量测定 分光光度法检测

分光光度法是食品中叶绿素含量测定的常用方法，其原理基于叶绿素分子对特定波长光的吸收特性，通过测定吸光度并代入公式计算含量。以下是分光光度法检测食品叶绿素含量的详细介绍：

一、检测原理

叶绿素a在663nm、叶绿素b在645nm处有特异性吸收峰，且吸光度与浓度符合朗伯-比尔定律（A=εbc）。通过测定吸光度并代入公式，可以计算出叶绿素a和叶绿素b的含量，进而得到总叶绿素含量。

二、检测步骤

样品处理：

均匀称取一定量的果蔬样品（如5g）于研钵中。

加入少许石英砂和碳酸钙粉（防止酸性降解），以及适量的提取液（如80%丙酮溶液）。

充分研磨后倒入容量瓶中，用提取液分次洗涤研钵并倒入容量瓶中，Zui后用提取液定容至所需体积。

提取与过滤：

将提取液静置一段时间（如3-5分钟）以充分提取叶绿素。

取一张滤纸，折叠后置于漏斗中，用提取液润湿。

沿玻璃棒将提取液倒入漏斗中，过滤到容量瓶中。

冲洗研钵、研棒和残渣数次，Zui后连同残渣一起倒入漏斗中，用提取液冲洗，直至滤纸和残渣中无绿色为止。

Zui后用提取液定容至所需体积，摇匀。

测定吸光度：

使用分光光度计，在645nm和663nm波长处分别测定提取液的吸光度。

以提取液为空白调零，确保测定结果的准确性。

计算叶绿素含量：

根据朗伯-比尔定律和叶绿素a、叶绿素b的吸光系数，可以推导出计算公式。

将测得的吸光度值代入公式，计算出提取液中叶绿素a和叶绿素b的质量浓度。

再根据果蔬样品质量和提取液的体积，可以计算出果蔬组织中叶绿素的含量（以每克果蔬组织鲜重中所含叶绿素的质量表示，即mg/g）。

三、注意事项

避免叶绿素分解：

应在弱光和低温下操作，研磨时间尽量短些。

提取过程应在避光、低温下进行，以防止叶绿素分解。

提取液选择：

对于新鲜的果蔬组织，应用无水丙酮提取色素较好。

提取干材料叶绿素时，一定要用80%丙酮溶液。

过滤与离心：

叶绿素提取液不能混浊，必须利用定量滤纸过滤或进行高速低温离心。

如果材料叶绿素含量较高时，可将提取液体积定容至更大体积，或对提取液进行适当倍数的稀释后再测定。

仪器校正：

波长精度要求高，必要时应对分光光度计的波长进行校正。

尽量使用高中档的仪器，如岛津UV-120、UV-240等。低档型号分光光度计如722型、721型在测定叶绿素a、叶绿素b时，因仪器的狭缝较宽，分光性能较差，单色光的纯度低，会导致叶绿素a的测定值偏低而叶绿素b的测定值偏高，a/b比值严重偏小。

四、应用案例

分光光度法已广泛应用于各种食品中叶绿素含量的测定，如蔬菜叶片、梨、苹果等果实圆片。通过该方法可以准确测定食品中叶绿素的含量，为食品的营养评价和品质控制提供重要依据。