松茸多糖检测 抗氧化活性测定 聚合度测定

以下是关于松茸多糖的检测（包括多糖含量测定、分子量分布分析及聚合度测定）的详细技术指南，涵盖检测原理、方法选择、操作步骤及数据分析：

一、松茸多糖含量检测

1. 检测标准依据

• GB 5009.8-2016《食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定》

• 苯酚-硫酸法（适用于总多糖测定，参考《中国药典》通则0712）。

2. 检测方法（苯酚-硫酸法）

• 原理：多糖在浓硫酸作用下水解为单糖，与苯酚反应生成橙黄色化合物，490 nm处比色测定。

• 步骤：

• 松茸粉末用80%乙醇脱脂后，沸水提取多糖，离心取上清液。

• 用Sevage法（氯仿:正丁醇=4:1）去除蛋白质。

1. 样品前处理：

2. 标准曲线：以葡萄糖为标准品（0~100 μg/mL），绘制吸光度-浓度曲线。

3. 测定：取样品液1 mL，加入5%苯酚1 mL和浓硫酸5 mL，静置10分钟后测吸光度。

• 计算：

  多糖含量 (%)=�×�×��×106×100多糖含量 (%)=W×106C×V×D×100

• �C：标准曲线测得浓度（μg/mL）；�V：体积（mL）；�D：稀释倍数；�W：样品重量（g）。

二、多糖分子量分布检测（凝胶渗透色谱-GPC）

1. 检测标准依据

• ISO 13885-1:2020《凝胶渗透色谱法测定聚合物的分子量分布》。

• 仪器：GPC系统（配示差折光检测器-RID或多角度激光光散射检测器-MALLS）。

2. 检测步骤

1. 色谱条件：

• 色谱柱：TSK-GELl（7.8 mm×300 mm，适用于多糖）。

• 流动相：0.1 mol/L NaNO₃（含0.02% NaN₃），流速0.5 mL/min。

• 柱温：30℃。

2. 标准品：葡聚糖系列（T10、T40、T70、T500）建立分子量校准曲线。

3. 样品处理：多糖溶液（1~5 mg/mL）过0.22 μm滤膜后进样（20 μL）。

4. 数据分析：

• 通过保留时间计算分子量分布（��Mw、��Mn、分散度�=��/��D=Mw/Mn）。

三、多糖聚合度测定

1. 方法选择

• 端基分析法（适用于还原性多糖）：

• 原理：通过测定多糖还原末端基团（如醛基）计算平均聚合度（DP）。

• 试剂：3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测定还原糖。

• 核磁共振法（NMR）：

• 通过1�1H或13�13C NMR分析糖苷键比例，推算DP（需高纯度样品）。

2. 端基分析法步骤

1. 水解多糖：用2 mol/L TFA（三氟乙酸）110℃水解2小时，中和后定容。

2. 还原糖测定：DNS法测水解液中的葡萄糖当量（540 nm）。

3. 计算DP：

   DP=总糖含量还原糖含量DP=还原糖含量总糖含量

四、关键注意事项

1. 多糖提取纯化：

• 需彻底去除蛋白质（Sevage法或酶解法）和小分子杂质（透析法）。

2. GPC系统校准：

• 定期用葡聚糖标准品验证柱效，避免柱效下降导致分子量偏差。

3. 数据一致性：

• 分子量检测需重复3次，RSD≤5%。