NY/T 2890-2016是中华人民共和国农业行业标准,规定了稻米中γ-氨基丁酸(GABA)含量的高效液相色谱测定方法,适用于稻米中γ-氨基丁酸含量的测定,具有方法准确、灵敏度高的特点,能够满足日常分析要求。以下为该标准的核心内容:
检测方法与原理
方法:采用高效液相色谱法(HPLC)进行测定。
原理:试样经乙醇-水溶液提取,再经4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯(DABS-Cl)衍生,Zui后用高效液相色谱法测定,以保留时间定性,外标法定量。
试剂与材料
试剂:除非另有规定,使用的试剂均为分析纯,水为GB/T6682中规定的一级水。具体包括无水乙醇(优级纯)、乙腈(色谱纯)、碳酸氢钠溶液、4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯溶液、三水合乙酸钠溶液等。
材料:γ-氨基丁酸(GABA)标准品,纯度≥99.9%。
仪器与设备
高效液相色谱仪:带紫外检测器或二极管阵列检测器。
组织捣碎机:转速1000r/min。
分析天平:感量为0.01mg、0.01g。
振荡水浴锅、超声波清洗器、旋涡混匀器、离心机(Zui大转速10000r/min)等。
分析步骤
试样制备:样品经混匀后缩分至约50g,研磨至全部通过孔径0.25mm(60目)筛,混匀后装入密闭容器中,室温下保存。
提取:称取1.0g样品于50ml离心管中,加入10ml提取溶液(无水乙醇+水=4+1,V+V),超声提取30min后,在旋涡混匀器上振荡2min,静置5min,于5000r/min离心5min,将上清液转入25mL容量瓶中。样品残渣再用10ml提取溶液提取1次,合并2次提取液,用提取液定容至25mL,摇匀,待衍生化。
衍生化:准确吸取1ml试样溶液或标准工作溶液于具塞试管中,加入0.20ml碳酸氢钠溶液和0.40ml4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯衍生试剂,混匀后在70℃水浴中衍生反应20min,用微孔滤膜过滤,待测。
仪器与设备
高效液相色谱仪(带紫外检测器或二极管阵列检测器)
组织捣碎机(转速1000r/min)
分析天平(感量为0.01mg、0.01g)
振荡水浴锅
超声波清洗器
旋涡混匀器
离心机(Zui大转速10000r/min)
色谱条件与测定
色谱柱:C18柱,250mm×4.6mm,5μm;或与之性能相当者。
检测波长:436nm。
柱温:30℃。
进样量:10μL。
流动相:乙腈-三水合乙酸钠溶液(35:65)。
流速:1.0mL/min。
结果计算与精密度
结果计算:试样中γ-氨基丁酸含量按公式计算,计算结果保留三位有效数字。
精密度:在重复性条件下,获得的两次独立测定结果的差值不超过算术平均值的10%;在再现性条件下,获得的两次独立测定结果的差值不得超过算术平均值的20%。