以下是关于 植物原料的OECD 404皮肤刺激性检测 的详细指南，涵盖标准方法、试验设计和结果解读：
一、标准依据
OECD 404：《急性皮肤刺激性/腐蚀性试验指南》（Acute DermalIrritation/Corrosion）
中国对应标准：GB/T 21604-2022 《化学品 皮肤刺激性/腐蚀性试验方法》（等效OECD 404）
适用范围：评估植物提取物、精油等天然原料对哺乳动物皮肤的局部毒性。
二、试验设计要点
1. 受试物准备
植物原料处理：
液体：直接使用或稀释至合理浓度（如载体为植物油时需注明稀释比例）。
固体：研磨成细粉，用生理盐水或溶剂（如橄榄油）调成糊状。
对照物：
阴性对照：生理盐水或溶剂。
阳性对照：1%十二烷基硫酸钠（SDS，已知轻度刺激物）。
2. 实验动物与伦理
动物选择：健康成年白化家兔（新西兰兔，雌雄各半），至少3只。
伦理要求：符合AAALAC或国家实验动物福利规范，减少痛苦（如使用麻醉）。
3. 试验步骤
皮肤准备：
剃除动物背部毛发（约10×15 cm²），避免损伤皮肤。
受试物施加：
将0.5 mL（液体）或0.5 g（固体）均匀涂于2.5×2.5 cm²纱布，覆盖皮肤并用半封闭绷带固定。
暴露时间：
4小时（常规）或24小时（高黏度物质），后清除残留物。
观察周期：
1、24、48、72小时后记录红斑、水肿等反应（按表1评分）。
4. 评分标准（Draize评分法）
| 反应类型 | 评分标准 | Zui高分 |
|---|---|---|
| 红斑 | 0（无）~4（严重红斑，伴出血） | 4 |
| 水肿 | 0（无）~4（严重水肿，隆起＞1mm） | 4 |
| 其他 | 表皮脱落、结痂等描述性记录 | - |
总刺激指数（PII）：单只动物多次观察的Zui高分均值，再取所有动物均值。
三、结果判定
| PII均值 | 刺激性分类 | 处理建议 |
|---|---|---|
| 0~0.9 | 无刺激（Non-irritant） | 可直接用于皮肤接触产品。 |
| 1.0~4.9 | 轻度刺激（Mild） | 需限制使用浓度或添加舒缓剂。 |
| ≥5.0 | 中度/重度刺激 | 禁止用于皮肤接触配方。 |
四、植物原料的特殊考量
光敏性评估：
含呋喃香豆素（如柑橘类精油）需额外进行 光毒性测试（OECD 432）。
变应性反应：
建议补充 皮肤致敏试验（OECD 406），尤其含酚类（如丁香酚）。
溶剂影响：
乙醇提取物可能增强渗透性，需注明溶剂残留量（如≤0.1%）。
五、替代方法（非动物试验）
体外模型：
重组人类表皮模型（EpiSkin™、EpiDerm™）：符合OECD 439，适用于筛查。
鸡胚绒毛尿囊膜试验（HET-CAM）：快速评估腐蚀性（替代家兔）。
六、检测报告与认证
报告内容：
受试物详细信息（拉丁学名、提取部位、浓度）。
动物编号、观察记录照片、PII计算表。
结论与GHS分类（如Category 2刺激物）。
认证机构：
国内：中检院（NIFDC）、上海替代方法研究中心（ACSR）。
国际：Eurofins、Charles River Laboratories。
