化妆品急性毒性试验 小鼠急性毒性试验LD50检测

化妆品毒理学评价方法

按原卫生部《消毒技术规范》2002中规定的方法进行。

1）急性毒性试验

选用NIH种小鼠20只，体重18~22g，雌雄各半，用一次Zui大剂量法，经口灌胃法染毒并连续观察两周。

2）蓄积毒性试验

选用SPF级NH小鼠40只，雌雄各半，体重(20±2)g，剂量递增法经口灌胃染毒20天。

3）Ames试验

用TA102、TA100、TA98、TA97标准菌株，剂量分别为40、200、1000、5000g/皿，添加S9和不添加S9，进行掺入法实验，并设空白对照组及阳性对照组。

4）小鼠骨髓微核试验

SPF级NIH小鼠50只，雌雄各半，体重18~25g，根据体重随机化分5组，每组10只。根据预实验结果，本样品LD为5000mg/kg，小鼠骨髓微核试验共设3个剂量组(1/2LD50、1/4LD50、1/8LD50)，分别为2500、1250、625mg/kg，设阴性对照组。阳性对照组动物经腹腔注射环磷酰胺剂量为50mg/kg。实验组动物用不同剂量样品灌胃两次，两次间隔24h，第2次灌胃染毒后6h采用颈椎脱臼法处死动物，取骨髓行Giemsa染色后光镜下观察含微核的嗜多染红细胞数及微核数量。

5）小鼠精子畸形试验

SPF级NIH小鼠25只，雄性，体重(30±5)g，根据体重随机化分5组，每组5只。根据预试验结果，设3个剂量组(1/8LD50、1/4LD50、1/2LD50)，分别为625、1250、2500mgkg，即低剂量组、中剂量组和高剂量组，并设阴性对照组。阳性对照组采用腹腔注射环磷酰胺法处理，剂量为50mg/kg，阴性对照组采用经口灌胃生理盐水，各组动物均连续灌胃5天，并于首次染毒后第35天颈椎脱臼法处死动物，取附睾尾常规法制作精子片并行伊红染色后镜检，每只受试动物计数1000个精子的形态，采用Wilcoxon秩和检验法对精子畸形数据进行统计学处理。

6）小鼠骨髓染色体畸变试验

选用SPF级NIH小鼠30只，体重(22±3)g，雌雄各半，分别设3个剂量组(1/20LD50、1/5LD50、1/2LD50)，分别为250、1000、2500mg/kg，设阴性对照组和阳性对照组(经口灌胃给予环磷酰胺50mg/kg)，两次给药时间间隔24h。于第2次给药24h时腹腔一次性注射秋水仙素4mg/kg，3h后采用颈椎脱臼法处死动物，分别取双侧股骨进行常规制片并行Giemsa染色，双盲法阅片。

7）30天喂养试验

选用SPF级SD大鼠40只，雌雄各半，体重(100±20)g，随机分成4组，每组10只，设低、中、高3组，剂量分别为250、500、1000mg/kg(即1/20LD50、1/10LD50、1/5LD50)，阴性对照组用纯净水、实验组用纯净水配置相应剂量的样品供动物自由饮用，动物均自由进食，共30天，实验期间每10天测体重一次并每天观察动物生长发育及活动情况。实验期结束时颈静脉取血并处死动物，取肝组织、双侧肾脏和睾丸组织称重并计算脏器系数，进行血常规检测血清生化检测、组织病理学检查等。

3、统计学分析

所有数据表示为均数标土标准差，骨髓细胞微核率服从Poinsson分布，平方根反正弦变换后进行t检验；骨髓染色体畸变率和精子畸形率采用X2检验；30天喂养试验结果进行方差分析。

化妆品毒理学评价结果

本实验结果显示，某品牌洗面奶对小鼠急性毒性试验LD50>5000mg/kg，为实际无毒级，小鼠蓄积毒性试验、骨髓微核试验、骨髓染色体畸变、Ames试验均未发现明显的毒性作用，但小鼠精子畸形试验结果提示高剂量组动物畸形精子数与对照组相比明显升高，差异有统计学意义，提示某品牌洗面奶超量使用可能有致小鼠精子畸形的作用，但其机理等尚需进一步研究；有报道显示洗面奶的主要成分表面活性剂能引起睾丸生殖细胞染色体畸变率增高，其表面活性物质十二烷基硫酸钠可使小鼠精子畸形率明显升高，与本实验结果一致。可能需要通过调整表面活性物质的用量以避免其对环境的污染和对健康的损害。