植物蛋白饮料中植物源性成分鉴定 BJS 201707标准

《植物蛋白饮料中植物源性成分鉴定》BJS201707标准是由国家食品药品监督管理zongju批准发布的食品补充检验方法。以下是对该标准的详细解读：

一、适用范围

该标准规定了食品中核桃源性成分、花生源性成分、杏仁源性成分、芝麻源性成分、榛子源性成分、大豆源性成分鉴定的实时荧光PCR方法。该方法适用于核桃露（乳）、杏仁露、果仁露等复合植物蛋白饮料中标识含有上述植物源性成分的检测及鉴定。

二、鉴定原理

该方法基于实时荧光PCR技术，通过提取试样中的基因组DNA，以DNA为模板，利用物种特异性引物及探针进行PCR扩增检测。设置阳性、阴性及空白对照，根据扩增的Ct值（循环阈值）判定试样中是否含有该源性成分。

三、试剂和材料

除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，实验用水应符合GB6682的要求。主要试剂包括：CTAB缓冲液、蛋白酶K、苯酚、氯仿、异戊醇、异丙醇、70%乙醇、TaqDNA聚合酶、dNTP混合液、TE缓冲液（Tris-HCl、EDTA缓冲液）、10×PCR缓冲液等。所有试剂均应用无DNA酶污染的容器分装。

四、仪器和设备

该方法所需的仪器和设备包括：组织研磨器、核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计、恒温水浴锅、离心机（离心力12,000g）、微量移液器（0.5μL~1000μL）、实时荧光PCR仪、涡旋振荡器、天平（感量g）等。

五、分析步骤

1. 试样总DNA的提取：根据样品类型（固体或液体）选择合适的提取方法。固体样品需粉碎后称取适量，液体样品需取适量后加入异丙醇沉淀。依次加入CTAB缓冲液、蛋白酶K溶液进行孵育，再加入苯酚：氯仿：异戊醇进行振荡抽提，Zui后通过异丙醇沉淀和TE缓冲液溶解得到DNA。

2. DNA浓度和纯度的测定：使用核酸蛋白分析仪检测DNA溶液的浓度及质量，OD260/280值应在1.7~1.9之间时，适宜于PCR扩增。

3. 实时荧光PCR扩增：设置反应体系总体积为25μL，包括10×PCR缓冲液、正反向引物、探针、dNTPs、TaqDNA聚合酶、DNA模板等。在实时荧光PCR仪上进行扩增反应，反应参数为50℃ 2min；95℃ 15min；95℃ 15s，60℃1min，共40个循环。

4. 实验对照：检验过程分别设置阳性对照、阴性对照和空白对照。以相应植物源物种提取的DNA为阳性对照，以已知不含该植物源的物种DNA为阴性对照，以灭菌水为空白对照。样品、内参照和对照设置两个平行的反应体系。

六、结果判断与表述

1. 质量控制：空白对照无FAM荧光信号检出；阴性对照无FAM荧光信号检出；阳性对照有FAM荧光信号检出，且FAM通道出现典型的扩增曲线，Ct值≤35.0；内参对照有荧光对数增长，且荧光通道出现典型的扩增曲线，相应的Ct值<30.0。

2. 结果判定：如Ct值≤35.0，则判定为被检样品阳性；如Ct值≥40.0，则判定为被检样品阴性；如35.0<Ct值<40.0，则需重复实验进行确认。

《植物蛋白饮料中植物源性成分鉴定》BJS201707标准是一种基于实时荧光PCR技术的植物源性成分鉴定方法，具有准确、快速、高效等优点，适用于复合植物蛋白饮料中标识的植物源性成分的检测及鉴定。